来源：中国药典2005年版P120 

体外培育牛黄

Tiwai Peiyu Niuhuang

CALCULUS BOVIS SATIVUS 

      本品以牛科动物牛Bos taurus domesticus Gmelin的新鲜胆汁作母液，加入去氧胆酸、胆酸、复合胆红素钙等制成。

     【性状】 本品呈球形或类球形，直径0.5～3cm。表面光滑，呈黄红色至棕黄色。体轻，质松脆，断面有同心层纹。气香，味苦而后甘，有清凉感，嚼之易碎，不粘牙。

     【鉴别】（1）取本品粉末少量，用清水调和，涂于指甲上，能将指甲染成黄色。

     （2）取本品粉末少许，用水合氯醛试液装片，不加热，置显微镜下观察：不规则团块由多数黄棕色或棕红色小颗粒集成；稍放置，色素迅速溶解，并显鲜明金黄色，久置后变绿色。

     （3）取本品粉末少量，加三氯甲烷1ml，摇匀，再加硫酸与浓过氧化氢溶液（30%）各2滴，振摇，溶液即显绿色。

     （4）取本品粉末0.1g，加盐酸1ml及三氯甲烷10ml，充分振摇，混匀，三氯甲烷层呈黄褐色，分取三氯甲烷层，加氢氧化钡试液5ml，振摇，即生成黄褐色沉淀。分离除去水层和沉淀，取三氯甲烷层约1ml，加醋酐1ml与硫酸2滴，摇匀，放置，溶液呈绿色。

     （5）取本品粉末10mg，加三氯甲烷20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸、去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录 Ⅵ B ）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（15：7：5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显两个相同颜色的荧光斑点。

     【检查】 水分 照水分测定法（附录 Ⅸ H 第一法）测定。不得过9.0%。

      游离胆红素 取本品细粉10mg，加三氯甲烷使成5ml，微温，振摇，滤过，弃去初滤液，取续滤液。照紫外-可见分光光度法（附录 Ⅴ A ），在453nm的波长处测定吸光度。吸光度不得过0.70。

     【含量测定】胆酸 取本品细粉0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加20%氢氧化钠溶液10ml，加热回流2小时，冷却，加稀盐酸19ml调节pH值至酸性，用乙酸乙酯提取4次（25ml，25ml，20ml，20ml），提取液均用同一铺有少量无水硫酸钠的脱脂棉滤过，滤液合并，回收溶剂，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取在105℃干燥至恒重的胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.48mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录 Ⅵ B ）试验，精密吸取供试品溶液2μl、对照品溶液1μl与3μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸丁酯-冰醋酸-甲酸（8：4：2：1）为展开剂，展距14～17cm，取出，晾干，喷以30%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法（附录 Ⅵ B 薄层色谱扫描法）进行扫描，波长：λs=380nm，λR=650nm，测量供试品吸光度积分值与对照品吸光度积分值，计算，即得。

      本品按干燥品计算，含胆酸（C24H40O5）不得少于6.0%。

      胆红素 对照品溶液的制备 取胆红素对照品10mg，精密称定，置100ml 棕色量瓶中，用三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得（每1ml中含胆红素10μg）。

      标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置具塞试管中，加乙醇至9ml，各精密加入重氮化溶液（甲液：取对氨基苯磺酸0.1g，加盐酸1.5ml与水适量使成100ml。乙液：取亚硝酸钠0.5g，用水溶解并稀释至100ml，置冰箱内保存。临用时取甲液10ml与乙液0.3ml，混匀）1ml，摇匀，在15～20℃的暗处放置1小时；以相应的试剂为空白。照紫外-可见分光光度法（附录 Ⅴ A ），在533nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

      测定法 取本品细粉10mg，精密称定，置锥形瓶中，加三氯甲烷-乙醇（7：3）的混合溶液60ml、盐酸1滴，摇匀，置水浴上加热回流30分钟，放冷，移至100ml棕色量瓶中。容器用少量混合溶液洗涤，洗液并入同一量瓶中，加上述混合溶液至刻度，摇匀。精密量取上清液10ml，置50ml棕色